Compatibility between Leptolegnia chapmanii and diflubenzuron and neem oil for the control of Aedes aegypti / Compatibilidad de Leptolegnia chapmanii con diflubenzurón y aceite de neem parael control de Aedes aegypti

Abstract Leptolegnia chapmanii is pathogenic to mosquito larvae. The compatibility betweenL. chapmanii and two insect growth regulators (IGR), diflubenzuron and neem oil, was evaluated. L. chapmanii was grown on culture media containing different concentrations of eachIGR. The mycelial growth was significantly reduced with the highest concentrations of IGR(F6,98= 268, p < 0.05). However, the production of zoospores (F6,56= 0.93, p > 0.05) and the lar-val mortality of Aedes aegypti (F6,56= 0.95, p > 0.05) were not significantly different amongtreatments. Furthermore, the percentage of adult emergence in the presence of different con-centrations of diflubenzuron or a neem formulation was determined, and the pathogenic activityof zoospores was evaluated at the concentrations that inhibit the emergence at 30, 50 and 90%.The pathogenicity of zoospores was not significantly different among treatments (F6,14= 0.54,p > 0.05), and the larval mortalities were above 90% in all cases.

Resumen Leptolegnia chapmanii es un patógeno de larvas de mosquitos. Se evaluó la com-patibilidad entre L. chapmanii y dos reguladores del crecimiento de insectos (IGR, por sus siglasen inglés), diflubenzurón y aceite de neem. L. chapmanii creció en medios de cultivo con diferentes concentraciones de estos IGR. El crecimiento micelial fue menor con las concentraciones más altas (F6,98= 268; p < 0,05). No hubo diferencias significativas en la producción de zoosporas (F6,56= 0,93; p > 0,05) ni en la mortalidad de las larvas de Aedes aegypti (F6,56= 0,95; p > 0,05).Se determinó el porcentaje de emergencia de adultos en presencia de diferentes concentra-ciones de diflubenzurón o de un formulado a base del aceite de neem. También se evaluó lapatogenicidad de las zoosporas a las concentraciones de los IGR que inhibieron la emergenciadel 30, 50 y 90% de adultos. No hubo diferencias significativas en la actividad de las zoosporasal comparar los tratamientos (F6,14= 054; p > 0,05). La mortalidad de las larvas fue superior al90%.

Efecto del estrés térmico y la radiación ultravioleta durante la producción masiva de Nomuraea rileyi / Effect of thermal stress and ultraviolet radiation during massive production of Nomuraea rileyi

Resumen El hongo entomopatógeno Nomuraea rileyi (aislamiento Nm006) ha demostrado un alto potencial para ser utilizado en el control biológico de gusano cogollero del maíz Spodoptera frugiperda. Sin embargo, este microorganismo es altamente susceptible a condiciones abióticas de estrés, lo que dificulta el desarrollo tecnológico de un bioplaguicida. Teniendo en cuenta lo anterior, el objetivo del trabajo fue evaluar el efecto individual de temperatura y luz ultravioleta mediante choques de estrés implementados en el proceso de fermentación sólida. Los conidios obtenidos de los diferentes tratamientos se caracterizaron microbiológicamente (rendimiento y germinación), enzimática (β-esterasa, N-acetilglucosaminidasa y quimoelastasa proteasa Pr1) y biológicamente mediante un bioensayo. Los choques de temperatura no afectaron el rendimiento, germinación y actividad biológica del aislamiento, pero si potenciaron la actividad β-esterasa y la actividad N-acetilglucosaminidasa en comparación con los conidios no expuestos. Con respecto a los choques con luz UV, éstos no mejoraron las características de los conidios de N. rileyi. Con base en los resultados, los choques térmicos a 5 °C y 45 °C, se seleccionaron para la fermentación del hongo, porque no afectaron negativamente ninguna característica y aumentaron las actividades enzimáticas β-esterasa y N-acetilglucosaminidasa de los conidios, lo que podría mejorar la actividad insecticida sobre S. frugiperda.

Abstract The entomopathogenic fungus Nomuraea rileyi (isolate Nm006) is a possible microbial control agent against "fall armyworm" Spodoptera frugiperda. However, this fungus is affected by abiotic stress conditions that cause a slow development of the biopesticide. The objective of this study was to assess the individual effect of abiotic stress (temperature and UV light) during solid fermentation of Nomuraea rileyi Nm006. Conidia were produced under different stress conditions and then characterized microbiologically (yield and germination), enzymatically (β-esterese, N-acetylglucosaminidase and subtilin-like protease Pr1) and biologically against Spodoptera frugiperda. All the treatments were compare with conidia produced without stress. Yield and N-acetylglucosaminidase activity did not improve in conidia produced under temperature stress. Germination, efficacy and β-esterase activity were significantly higher in conidia exposed to thermal shock compared to unexposed conidia. UV light shocks did not improve any characteristics of Nm006. Thermal stress at 5 °C and 45 °C were select for fungus fermentation because conidia had higher enzymatic activity (β-esterase y N-acetilglucosaminidase) and any characteristic was negatively affect. This thermal stress could be a strategy to improve the insecticidal activity against S. frugiperda.

White grub (Coleoptera: Melolonthidae) mortality induced by Ophiocordyceps melolonthae / Mortalidade em corós (Coleoptera: Melolonthidae) induzida por Ophiocordyceps melolonthae

ABSTRACT: The occurrence of white grub roots in soybean crops in the South of Brazil has gradually increased. However, there is not information on the biological control of grubs by entomopathogenic fungi. This study aimed to induce infection by Ophiocordyceps melolonthae and analyze longevity in Cyclocephala modesta and Dyscinetus gagates larvae (Coleoptera: Melolonthidae). In the laboratory, Cyclocephala modesta and Dyscinetus gagates had a mortality rate of 85% and 75%, respectively.

RESUMO: A ocorrência de corós-praga de raízes em lavoura de soja, no Sul do Brasil, tem gradualmente aumentado. Entretanto, não há informação sobre controle biológico de corós por fungos entomopatogênicos. Este estudo tem o objetivo de induzir a infecção por Ophiocordyceps melolonthae e analisar a longevidade em larvas de Cyclocephala modesta e Dyscinetus gagates (Coleoptera: Melolonthidae). Em laboratório, Cyclocephala modesta e Dyscinetus gagates apresentaram uma taxa de mortalidade de 85% e 75%, respectivamente.

Selection and characterization of Bacillus thuringiensis isolates with a high insecticidal activity against Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) / Seleção e caracterização de isolados de Bacillus thuringiensis com Alta atividade inseticida contra Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae)

Spodoptera frugiperda (SMITH, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) affects diverse crops of great economic interest, for instance, it can cause severe yield losses in maize, rice and sorghum. In this study, a selection and characterization of Bacillus thuringiensis (BERLINER, 1911) isolates with a high insecticidal activity against S. frugiperda was performed. Fifty-two crystal-forming B. thuringiensis isolates that were identified from 3384 Bacillus-like colonies were examined and screened by PCR for the presence cry genes (cry1, cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1D, cry2 and cry2Ab). Four isolates that showed high toxicity towards S. frugiperda were shown to harbor cry2 genes. The crystals were analyzed by electron microscopy and showed bipyramidal and cuboidal shapes. Furthermore, these four isolates had lethal concentration (LC50) values of 44.5 ng/cm2 (SUFT01), 74.0 ng/cm2 (SUFT02), 89.0 ng/cm2 (SUFT03) and 108 ng/cm2 (SUFT 04) to neonate S. frugiperda larvae. An ultrastructural analysis of midgut cells from S. frugiperda incubated with the SUFT01 spore-crystal complex showed disruptions in cellular integrity and in the microvilli of the midgut columnar cells. The isolates characterized in this work are good candidates for the control of S. frugiperda, and could be used for the formulation of new bioinsecticides.

Spodoptera frugiperda (SMITH, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) afeta diversas culturas de grande interesse econômico, por exemplo, pode causar severas perdas em milho, arroz e sorgo. Neste estudo, foi realizada uma seleção e caracterização de isolados de Bacillus thuringiensis (BERLINER, 1911) com elevada atividade inseticida contra S. frugiperda. Cinquenta e dois isolados formadores de cristal B. thuringiensis que foram identificados a partir de 3384 colônias foram examinados e testados por PCR para a presença dos genes cry (cry1, cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1D, cry2 e cry2Ab). Quatro isolados que apresentaram alta toxicidade contra S. frugiperda foram mostrados para abrigar os genes cry2. Os cristais foram analisados por microscopia eletrônica e mostraram formas bipiramidais e cúbicas. Os valores da concentração letal (CL50) destes quatro isolados foram de 44,5 ng / cm2 (SUFT01), 74,0 ng / cm2 (SUFT02), 89,0 ng / cm2 (SUFT03) e 108 ng / cm2 (suft 04) para larvas recém-eclodidas de S. frugiperda. Uma análise ultra-estrutural das células do intestino médio de S. frugiperda incubadas com complexo esporo-cristal do isolado SUFT01 mostrou rupturas na integridade celular e microvilosidades das células cilíndricas do intestino médio. Neste estudo, o alto nível de atividade inseticida de isolados os torna excelentes candidatos para o controlo de S. frugiperda, e pode proporcionar alternativas no controle destas populações de pragas, bem como a formação de novos bioinsecticidas.

Compatibilidade de isolados de Beauveria bassiana a inseticidas, herbicidas e maturadores em condições de laboratório / Compatibility of Beauveria bassiana in the laboratory for insecticides, herbicides and ripeners

Foram avaliadas as diferenças de toxicidade de inseticidas, herbicidas e maturadores para os isolados AM 09, JAB 07, IBCB 07 e JAB 46 de Beauveria bassiana, por intermédio de experimentos realizados em meio de cultura. Os isolados foram inoculados em meio de batata, dextrose e ágar (BDA) contendo os agroquímicos. Foram avaliados a germinação, o crescimento e a esporulação e, com base nesses parâmetros, fez-se a classificação toxicológica dos agroquímicos para cada isolado. O inseticida Actara 250 WG(r) foi considerado compatível com AM 09, moderadamente tóxico para JAB 07 e tóxico para IBCB 07 e JAB 46. O Regente WG 800(r) foi considerado compatível com todos os isolados, já o Temik 150(r) se mostrou tóxico. Quanto aos herbicidas, o produto Glifosato Nortox(r) foi considerado compatível com AM 09, moderadamente tóxico para IBCB 07 e JAB 46 e tóxico para JAB 07. Plateau(r) foi classificado como moderadamente tóxico para AM 09 e JAB 07 e tóxico para IBCB 07 e JAB 46. Contain(r), DMA(r), Karmex(r), Sencor 480(r) e Velpar-K(r) foram classificados como tóxicos para todos os isolados. Tratando-se dos maturadores, tanto Curavial K(r) quanto Moddus(r) se mostraram tóxicos para todos os isolados. Os resultados revelaram que há variação entre os isolados de B. bassiana quanto à toxicidade dos agroquímicos. AM 09 foi o mais tolerante à ação tóxica dos produtos. A germinação sofreu menor efeito do que o crescimento e a esporulação, e JAB 07 foi o isolado menos afetado pelos agroquímicos com relação a esse parâmetro.(AU)

The differences in the toxicity of pesticides, herbicides and ripeners for isolates AM 09, JAB 07, IBCB 07 e JAB 46 of Beauveria bassiana were evaluated through experiments conducted in culture medium. The isolates were cultured on potato dextrose agar (PDA) containing agrochemicals. Germination, growth and sporulation were evaluated and, based on these parameters, the toxicological classification of pesticides for each isolate was made. The insecticide Actara(r) was considered compatible with AM 09, moderately toxic for JAB 07 and toxic for IBCB 07 and JAB 46. Regente WG 800(r) was considered compatible with all isolates, while Temik 150(r) showed to be toxic. In relation to the herbicides, the product Glifosato Nortox(r) was considered compatible with AM 09, moderately toxic for IBCB 07 and JAB 46 and toxic for JAB 07. Plateau(r) was classified as moderately toxic for AM 09 and JAB 07, and toxic for IBCB 07 and JAB 46. Contain(r), DMA(r), Karmex(r), Sencor 480(r) e Velpar-K(r) were classified as toxic for all isolates. In the case of ripeners, both Curavial K(r) and Moddus(r) showed to be toxic for all the isolates. The results revealed that there is variation between isolates of B. bassiana regarding the toxicity profile of agrochemicals. AM 09 was the most tolerant to the toxic action of the products. Germination suffered minor effect than growth and sporulation, and JAB 07 was the isolate less affected by agrochemicals with regard to this parameter.(AU)

Adsorption of Toxic Metals and Control of Mosquitos-borne Disease by Lysinibacillus sphaericus: Dual Benefits for Health and Environment / 生物医学与环境科学（英文）

<p><b>OBJECTIVE</b>Assessment of the bacterium L. sphaericus as a dual-action candidate for biological control of mosquito-borne diseases and bioremediation of toxic metals.</p><p><b>METHODS</b>Larvae of the mosquito, C. quinquefasciatus, were first evaluated for metal tolerance and then exposed to 5 ppm cadmium, chromium, arsenic, and lead in assays together with seven strains of L. sphaericus. A probit regression analysis was used to estimate the LC(50) of Cd, Cr, As, and Pb to C. quinquefasciatus. An analysis of covariance and multifactorial ANOVA examined the metal biosorption and larvicidal properties of the seven strains of L. sphaericus.</p><p><b>RESULTS</b>We found that L. sphaericus adsorbed the toxic metal ions and was toxic against mosquito larvae. The L. sphaericus strain III(3)7 resulted in a larvae mortality of over 80% for all the tested metals. This strain also exhibited the capacity to adsorb 76% of arsenic, 32% of lead, 25% of chromium, and 7% of cadmium.</p><p><b>CONCLUSION</b>This study found combined metal adsorption and larval toxicity associated with three strains of L. sphaericus [III(3)7, OT4b.31, and CBAM5]. This suggests that a combination of these strains shows strong dual potential for biological control of mosquitos in heavy metal-contaminated areas and remediate the heavy metal contamination as well.</p>

First report of the occurrence of Ophiocordyceps melolonthae (Ascomycota: Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) in larvae of Diloboderus abderus Sturm (Coleoptera: Melolonthidae) in Brazil / Primeiro registro da ocorrência de Ophiocordyceps melolonthae (Ascomycota: Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) em larvas de Diloboderus abderus Sturm (Coleoptera: Melolonthidae) no Brasil

This note is the first report on the infection of Diloboderus abderus Sturm (Coleoptera: Melolonthidae) larvae by the fungusOphiocordyceps melolonthae (Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) in subtropical Brazil. Identification was made possible by extraction and sequencing of the fungal DNA that was covering the larvae's mouthparts, prothorax, cuticle, and digestive tract (alimentary canal). Amplification, sequencing and comparison of the ITS region of the ribosomal DNA with voucher sequences of GenBank were performed and were 95% similar to Ophiocordyceps melolonthae. The fungus is an entomopathogen which attacks Melolonthidae larvae, having scientific and economic importance because of the need for increased knowledge on its distribution and on alternatives for biological control of white grubs.

Esta nota é o primeiro registro da infecção de larvas de Diloboderus abderus Sturm pelo fungoOphiocordyceps melolonthae na região subtropical do Brasil. A identificação foi possível graças è extração e sequenciamento do DNA do fungo que cobria o aparelho bucal, protórax, cutícula e aparelho digestivo (canal alimentar) das larvas. Amplificação, sequenciamento e comparação da região ITS com sequências voucher do GenBank foram realizados, mostrando 95% de similaridade com Ophiocordyceps melolonthae. O fungo é um entomopatógeno que ataca larvas Melolonthidae, tendo importância científica e econômica devido è necessidade de aumento do conhecimento sobre sua distribuição e de alternativas de controle biológico de corós.

Persistência do baculovírus anticarsia após diferentes regimes pluviométricos / Velvet-bean nucleopolyhedrovirus persistence after different rainfall intensities

A persistência do vírus da lagarta-da-soja AgMNPV, produzido de forma bruta (maceração de lagartas) e liofilizada (produto comercial), foi avaliada após a aplicação em plantas de soja seguida de diferentes regimes pluviométricos (0; 10; 20; 30mm) na intensidade de 30mm.hora-1. Essas precipitações foram simuladas com microaspersores, em casa-de-vegetação. Após a simulação, a soja foi oferecida às lagartas zero, três, seis e nove dias após a aplicação (DAP). As plantas, durante esse período, foram mantidas em casa-de-vegetação, protegidas da chuva. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado em condições controladas (UR 70±10%, 25±2°C, fotofase de 14h), em esquema fatorial 4 (intensidades de precipitações pluviométricas) x 2 (formulações de vírus, bruta e liofilizada) com quatro repetições, com 30 lagartas cada. Os resultados comprovam que precipitações até 30mm, em 60 minutos, não reduzem a mortalidade das lagartas, causada por AgMNPV em ambas as formas de produção, quando a oferta das folhas às lagartas ocorre no mesmo dia da aplicação. As formas de preparo do AgMNPV influenciaram na persistência do vírus aos seis DAP. Nesta avaliação, a taxa de mortalidade foi superior a 90%, quando o produto bruto foi aplicado e inferior a 50% para o produto liofilizado. Esses resultados indicam que a eficiência de AgMNPV não é afetada por chuvas de até 30mm em uma hora, para ambas as formas de preparo do AgMNPV. Entretanto, ao longo dos dias, o método de preparo bruto apresenta-se mais eficiente, devido à maior persistência sobre a área foliar da soja após a lavagem pela água.

The persistence of the velvet-bean nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) produced raw (macerated caterpillars) and lyophilized (commercial product) was evaluated after spraying in soybean plants followed by different simulated rainfall rates (0; 10; 20; 30mm) at 30mm hour-1 rate. Rainfall was simulated in greenhouse through micro sprinkler irrigation. After simulated rainfall, soybean leaves were offered to caterpillar in laboratory conditions at zero, three, six and nine days after spraying (DAS). Soybean plants were kept in greenhouse protected from rainfall. Trial was carried out in complete randomized design, under controlled conditions (RH 70%±10%, 25±2°C, 14h photophase) in a factorial 4 (rainfall rates) x2 (formulations, raw and lyophilized) with four replicates of 30 caterpillars. Results indicate that rainfall rates up to 30mm, in 60 minutes, do not decrease caterpillar mortality caused by AgMNPV regarding to both tested baculovirus formulations, raw and lyophilized virus, when leaves were offered to caterpillars at zero DAS. However, virus production (raw or lyophilized) impacted its persistence. Six DAS, mortality rate was higher than 90% when the virus was applied raw and lower than 50% when it was applied lyophilized. These results suggest that both raw and lyophilized AgMNPV efficacy is not impaired by 30-mm rainfalls at 30mm hour-1 rate. However, raw virus was more efficient in a long term evaluation since it had longer persistence on soybean leaves after being water washed.

Compatibilidad in vitro de un bioplaguicida a base de Lecanicillium lecanii (Hypocreales: Clavicipitaceae) con agroquímicos empleados en los cultivos de algodón y berenjena / In vitro compatibility of the biopesticide based on Lecanicillium lecanii (Hypocreales: Clavicipitaceae) with agrochemicals used in cotton and eggplant crops

El aislamiento colombiano de Lecanicillium lecanii Vl026 formulado como un granulado dispersable WG, ha demostrado una alta eficiencia para el control de Bemisia tabaci en los cultivos de algodón y berenjena. Teniendo en cuenta el potencial de este bioinsumo, el objetivo del siguiente fue determinar la compatibilidad in vitro del bioplaguicida a base de L. lecanii con agroquímicos (insecticidas y fungicidas) que se utilizan con mayor frecuencia en dichos cultivos. La compatibilidad in vitro se estableció determinando el porcentaje de germinación (%) y las Unidades Formadoras de Colonia (UFC) en presencia de los plaguicidas y estimando la concentración inhibitoria 10 (CI10). Cada plaguicida se evaluó a la dosis recomendada, a la mitad y a un cuarto de ésta. Los fungicidas químicos (Benomil®, Vitavax®, Ridomil® y Manzate®) no fueron compatibles con L. lecanii, ya que inhibieron la germinación y las Unidades Formadoras de Colonia del hongo en las tres dosis evaluadas. En cuanto a los insecticidas químicos, el producto Confidor® no inhibió la viabilidad en comparación con el tratamiento control, considerándose compatible con el bioplaguicida. Cuando se evaluó la dosis completa de los demás insecticidas (Oportune®, Actara®, Match® y Malathion®) se obtuvieron germinaciones inferiores al 80%, por lo que dichos productos se clasificaron como no compatibles con el bioplaguicida a base de L. lecanii. El único agroquímico que fue compatible en condiciones in vitro con L. lecanii fue el producto Confidor®. Sin embargo, se recomienda evaluar el efecto in vivo de los productos químicos habitualmente utilizados por los agricultores sobre L. lecanii, con el propósito de desarrollar y establecer estrategias de manejo integrado de la mosca blanca Bemisia tabaci.

A colombian isolate of Lecanicillium lecanii formulated as dispersible granules WG, has shown high efficiency to control Bemisia tabaci in cotton and eggplant crops. Considering that, the objetive of this work was to determine the in vitro compatibility of biopesticide based on L. lecanii with agrochemicals (insecticides and fungicides) that are most frequently used in tobacco and eggplant crops. In vitro compatibility of L. lecanii with agrochemicals was determinated by germination (%) and Colony Forming Units (CFU) in the presence of pesticides and also estimating the inhibitory concentration 10 (IC10). Each agrochemical was evaluated at the recommended dose, a half and a quarter of it. For the three doses tested (Benomyl®, Vitavax®, Ridomil® and Manzate®) were not compatible with L. lecanii, because these inhibited germination and Colony Forming Units of the fungus. Confidor® did not inhibit viability compared to control treatment, and it was considered compatible with the biopesticide. When the recommended dose (Oportune®, Actara®, Match® and Malathion®)was used, the germination of the L. lecanii was lower than 80%, then these products were classified as non-compatible with the biopesticide based on L. lecanii. The only agrochemical that was compatible in vitro with L. lecanii was Confidor®. However, is necesary to evaluate the in vivo effect of agrochemicals commonly used by farmers on L. lecanii, in order to develop and establish integrated management strategies for the control of the whitefly Bemisia tabaci.

Efeito de beauveria bassiana (bals.) Vuillemin e Metarhizium anisopliae (metsch.) sorokin nos parâmetros biológicos de trichogramma atopovirilia oatman & platner, 1983 (hymenoptera: trichogrammatidae) / Effect of Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin and Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin on the biological parameters of Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae)

Dois experimentos foram realizados para avaliar o efeito de duas formulações comerciais à base de Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin e Metarhizium anisopliae (Metsch., Sorokin sobre os parâmetros biológicos de Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner, 1983. No primeiro experimento, cartelas com ovos de Spodoptera frugiperda, 1797 foram mergulhadas em suspensões preparadas com os produtos e, em seguida, colocadas à disposição dos parasitóides para oviposição, durante um período de 24 horas. No segundo, fêmeas do parasitóide foram alimentadas com uma solução mel e suspensão de conídios. Em ambos os experimentos as fêmeas mortas foram colocadas em uma câmara úmida para observar a esporulação dos fungos. Os tratamentos foram mantidos em câmara climatizada com temperatura de 25±1º C, umidade relativa de 70±10 por cento e fotofase de 14 horas. Avaliou-se a longevidade e mortalidade dos adultos, índice de parasitismo, emergência do parasitóide, número de indivíduos por ovo e razão sexual dos descendentes. As formulações não interferiram nos parâmetros avaliados e não foi observada a esporulação do fungo no cadáver do parasitóide adulto. É possível inferir que T. atopovirilia e os fungos entomopatogênicos B. bassiana e M. anisopliae são compatíveis e podem ser empregados simultaneamente em programas de manejo integrado de S. frugiperda.

Two bioassays were performed to evaluate the effect of two biopesticides based on Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin and Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin on the biological parameters of Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner, 1983. In the first one, displays with S. frugiperda, 1797 eggs were dropped into the biopesticide suspension and offered to the parasitoid females for 24 hours. In the second one, parasitoid females were fed with a suspension containing honey and biopesticide suspension. In both cases, after the parasitoid death they were mantained into a humid chamber to observe fungus sporulation. The experiments were maintained in a climatized chamber at 25±1º C, RH 70± 10 percent, and photophase of 14 hours. The longevity and adult mortality, total parasitism, progeny emergency, number of individuals per egg and sexual ratio were analyzed. The biopesticides did not affect the evaluated parameters and no fungus sporulation was observed in dead females. It is possible to assert that the entomopathogenic fungi B. bassiana and M. anisopliae can be used with T. atopovirilia in IPM S. frugiperda systems.

Seleção e caracterização molecular de Bacillus thuringiensis Berliner com atividade tóxica para Trichoplusia ni Huebner (Lepidoptera: Noctuidae) / Selection and molecular characterization of Bacillus thuringiensis Berliner with toxic activity against Trichoplusia ni Huebner (Lepidoptera: Noctuidae)

Trichoplusia ni é uma praga polífaga importante em plantios de crucíferas, soja e algodão. O presente estudo objetivou selecionar e caracterizar por método molecular isolados de Bacillus thuringiensis (Bt) com potencial para atuar com agentes de controle biológico de T. ni. Para os bioensaios de patogenicidade, uma alíquota com 3 x 108 esporos/mL de suspensão de Bt de cada isolado foi aplicada na superfície do disco de dieta artificial, previamente distribuída em placas de acrílico com 50 lagartas, distribuídas em 5 repetições. Nos bioensaios para a obtenção da CL50, apenas os isolados com 100% de mortalidade foram pré-selecionados, sendo testadas as seguintes concentrações: 102, 5 x 102, 103, 2 x 103, 4 x 103, 6 x 103, 8 x 103 esporos/mL, sendo os tratamentos compostos por 120 lagartas, distribuídas em 3 repetições. Foi feita caracterização molecular para detectar os genes cry1, cry2 e Vip para os isolados que obtiveram mortalidade acima de 95%. Os isolados HD-1 (Padrão), Bt-1043N-V, Bt-1034F, Bt-1009K, Bt-1000, Bt-969A causaram 100% de mortalidade nos testes de patogenicidade e CL50 de 1,17 x 103, 1,45 x 103, 1,46 x 103, 1,01 x 103, 9,43 x 102, 1,22 x 103, respectivamente. Não foram encontrados genes cry1, cry2 e Vip nos isolados testados, podendo outras toxinas Cry estar causando a mortalidade de T. ni, visto que os isolados testados são específicos para a ordem Lepidoptera. Estes isolados mostraram potencial para o controle de T. ni, sendo virulentos a este inseto, com potencial para serem utilizados em programa de manejo desta praga.

Trichoplusia ni is a polyphagous pest that is becoming a major pest in plantations of cruciferous crops, soybeans and cotton. This study was aimed to select and molecularly characterize efficient isolates of Bacillus thuringiensis (Bt) for the control of T. ni. For the bioassays of pathogenicity, an aliquot with a 3 x 108 spores/mL suspension of Bt of each isolate was applied on the surface of the artificial diet disk, previously distributed on acrylic plates with 50 larvae, distributed in 5 repetitions. In bioassays to obtain the LC50, only isolates with 100% mortality were preselected, and tests were carried out at the concentrations 102, 5 x 102, 103, 2 x 103, 4 x 103, 6 x 103, and 8 x 103 spores/mL, and the treatments consisting of 120 larvae, distributed in 3 repetitions. A molecular characterization was performed to detect the genes cry1, cry2 and Vip for the isolates which obtained mortality over 95%. Isolates HD-1 (Standard), Bt-1043N-V, Bt-1034F, Bt-1009K, Bt-1000 and Bt-969A caused 100% mortality in the test for pathogenicity and presented an LC50 of 1.17 x 103, 1.45 x 103, 1, 46 x 103, 1.01 x 103, 9.43 x 102, 1.22 x 103, respectively. Genes cry1, cry2 and Vip were not found in the isolates tested, and other Cry toxins may have been causing the mortality of T. ni, since the isolates tested are specific for the Lepidoptera order. These isolates showed potential for the control of T. ni, being aggressive to this insect, with a potential to be used in a pest management program for this species.

Relationship between chemical properties of the soil and the occurrence of Bacillus thuringiensis / Relação entre as características químicas do solo e a ocorrência de Bacillus thuringiensis

The soil and other substrates such as mushroom compounds are the main sources of new Bacillus thuringiensis (Bt) isolates for Integrated Pest Management programs. This study describes the relationship between chemical properties of the soil (pH, OM, P3+, K1+, Ca2+, Mg2+, H1++Al3+, B3+, Cu2+, Fe2+, Mn2+ and Zn2+) and the occurrence of Bt in Brazil. A total of 1,197 bacterial colonies were obtained, being 512 of them identified as Bt. The Bt index (iBt), which is the relation between Bt colonies and bacterial counts ranged from 0.18 to 0.86. The iBt may be expressed with the formula: iBt= -0.4 + 0.6Ca2+ + 0.07Cu2+ + 0.009Fe2+ - 0.53Mg2+ -0.12Mn2+ + 1.26Zn2+. A cluster of samples with fewer colonies and a high negative correlation (antagonism) between Mn2+ and Ca2+; Mg2+ and Ca2+; Mg2+ and Zn2+; Mn2+ and Zn2+ and a high positive correlation (synergism) between Mn2+ and Mg2+; Zn2+ and Ca2+ was observed. The relationship between these elements and their effect on the Bt presence are discussed.

O solo e outros substratos, como restos vegetais são as principais fontes de obtenção de isolados de Bacillus thuringiensis (Bt) para programas de Manejo Integrado de Pragas. Este estudo descreve uma investigação sobre a relação entre algumas propriedades químicas do solo (pH, MO, P3+, K1+, Ca2+, Mg2+, H1+ + Al3+, B3+, Cu2+, Fe2+, Mn2+ e Zn2+) e a ocorrência de Bt em solos do Brasil. Entre 1197 colônias bacterianas, 512 foram identificados como Bt. O índice de Bt (iBt), que é a relação entre o número de colônias de Bt e de colônias bacterianas, variou de 0,18 a 0,86. Os dados obtidos mostraram que o iBt pode ser representado pelo iBt da fórmula = -0,.4 + 0,6Ca2+ + 0,07Cu2+ + 0,009Fe2+ - 0,53Mg2+ -0,12Mn2+ + 1,26Zn2+. Observou-se o agrupamento das amostras com poucas colônias; uma correlação negativa elevada (antagonismo) entre Mn2+ e Ca2+, Mg2+ e Ca2+, Mg2+ e Zn2+, Mn2+ e Zn2+; uma correlação positiva elevada (sinergismo) entre Mn2+ e Mg2+, Zn2+ e Ca2+. A relação entre esses elementos e o efeito dessa relação na presença de Bt são discutidos.

Bioassay assessment of metarhizium anisopliae (metchnikoff) sorokin (deuteromycota: hyphomycetes) against Oncometopia facialis (signoret) (hemiptera: cicadellidae)

Citrus Variegated Chlorosis (CVC) is an economically important, destructive disease in Brazil and is caused by Xylella fastidiosa and transmitted by sharpshooter insects. In this study, the efficacy of the fungus Metarhizium anisopliae in controlling the sharpshooter Oncometopia facialis was studied by bioassay conditions. In the bioassay, insects were sprayed with a suspension containing 5 X 10(7) conidia mL-1. Adults captured in the field were treated in groups of 10 in a total of 11 replications per treatment. Significant differences between the natural mortality and the mortality of insects treated with the fungus were observed 6 days after inoculations (P<0.05). These significant differences increased until 10 days after treatment. The fungus caused 87.1 percent mortality, with the LT50 varying from 5 to 6 days. The LC50 was 1.2 X 10(6) conidia mL-1, varying from 7.7 X 10(5) to 2 X 10(6) conidia mL-1. The results showed that the sharpshooter O. facialis was susceptible to the entomopathogenic action of M. anisopliae in controlled condition during bioassay.

A Clorose Variegada dos Citros (CVC) é uma doença economicamente importante e destrutiva no Brasil e é causada pela bactéria Xylella fastidiosa e transmitida por insetos vetores tal como Oncometopia facialis. Nesse estudo, a eficácia do fungo Metarhizium anisopliae em controlar o inseto vetor O. facialis foi estudada em condições de bioensaio. Nesse bioensaio, insetos foram pulverizados com uma suspensão de 5 X 10(7) conídio mL-1. Insetos-adultos capturados no campo foram tratados em grupos de 10, em um total de 11 replicatas por tratamento. Diferenças significativas entre a mortalidade natural e a mortalidade dos insetos tratados com o fungo foram observadas em 6 dias após a inoculação (P<0.05). Estas diferenças significativas aumentaram antes do décimo dia após o tratamento. O fungo causou uma mortalidade de 87,1 por cento, com uma LT50 variando entre 5 e 6 dias. A LC50 foi de 1,2 X 10(6) conídio mL-1, variando de 7,7 X 10(5) a 2 X 10(6) conídio mL-1. Estes resultados mostraram que o vetor O. facialis foi susceptível a ação entomopatogênica de M. anisopliae em condições controladas durante o bioensaio.

Natural Enemies and Competitors of Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Scolytidae) in Colombia / Inimigos Naturais e Competidores da Broca-do-Café Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Scolytidae) na Colômbia

O objetivo desta pesquisa foi levantar e registrar os inimigos naturais e competidores da broca-do-café, Hypothenemus hampei (Ferrari), na região cafeeira colombiana. Apesar da recente introdução da broca do café na Colômbia, foram registrados 25 inimigos naturais, incluindo o fungo Beauveria bassiana. Com exceção do fungo, os outros organismos são registros novos de inimigos naturais da broca-do-café, o que demonstra o pouco conhecimento existente sobre esses agentes de controle natural e sobre os competidores que podem contribuir para manter as populações da praga em equilíbrio. O grupo com maior número de inimigos naturais foi o dos predadores, seguido pelos competidores, fungos, bactérias e protozoários. Somente uma vespa parasitóide foi registrada atacando os adultos da broca-do-café.

The objective of this research was to survey and record the natural enemies and competitors of the Coffee Berry Borer (CBB) Hypothenemus hampei (Ferrari) in the Colombian coffee region. Despite the recently introduction of CBB to Colombia, 25 natural enemies were recorded, including Beauveria bassiana. Except for this fungus, the other organisms are new records of natural enemies of CBB. This emphasizes the little knowledge about these natural control agents and competitors that can help to keep the CBB population under control. The predators were the group with higher number of natural enemies followed by the competitors, fungi, bacteria and protozoans. Only one parasitoid wasp was recorded attacking CBB adults.

Ocorrência natural de Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. em adultos hibernantes de Oebalus poecilus (Dallas) (Hemiptera: Pentatomidae) / Natural occurrence of Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. in hibernating adults of Oebalus poecilus (Dallas) (Hemiptera: Pentatomidae)

Hibernating adults of Oebalus poecilus (Dallas) were collected from May to December of 2000, in a bamboo thicket located in Eldorado do Sul County (30º 02’ S e 51º 23’ W), RS. The fungi isolation was done from dead insects, which presented a white micelial growth, in PDA culture medium. The pathogenicity of the isolate was tested in laboratory conditions using three concentrations of conidium suspension (5 x 105; 5 x 107; 1.25 x 109 conidia/ml). The fungus was identified as Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. and was deposited in a culture collection of entomopathogenic fungi in Embrapa Sojawith access number Bb353. The isolate was pathogenic in all concentrations, being the highest mortality (84.4%) recorded in 1.25 x 109 conídios/ml concentration. This is the first record of this fungus on O. poecillus, in natural conditions.

Adultos hibernantes de Oebalus poecilus (Dallas) foram coletados de maio a dezembro de 2000, em um taquaral situado no município de Eldorado do Sul (30º 02’ S e 51º 23’ W), RS. A partir deum inseto morto que apresentava crescimento micelial branco sobre o corpo, realizou-se o isolamento do fungo em meio de cultura BDA. Em laboratório testou-se a patogenicidade do isolado em três concentrações de suspensões de conídios (5 x 105; 5 x 107; 1,25 x 109 conídios/ml). O fungo foi identificado como Beauveria bassiana (Bals.) Vuill., e armazenado na coleção de culturas de fungos entomopatogênicos da Embrapa Soja com o número de acesso Bb353. O isolado mostrou-se patogênico em todas as concentrações utilizadas, sendo o maior percentual de mortalidade (84,4%) registrado na concentração mais elevada de conídios. Este foi o primeiro registro, em condições naturais, de B. bassiana sobre O. poecilus.

Ocorrência de Baculovirus em Lagartas de Perigonia lusca (Fabr. ) (Lep. Sphingidae) no Brasil / Occurrence of Baculovirus on Perigonia lusca (Fabricius) (Lepidoptera, Sphingidae) Larvae in Brazil

A large number of dead Perigonia lusca (Lepidoptera, Sphingidae) larvae were observed in "Paraguay tea" (Ilex paraguariensis) plantations in the West of Paraná State. Live insects were collected from these fields, maintained on "Paraguay tea" leaves in laboratory and observed daily. The dead larvae were macerated and the resulting suspension was observed under microscope. Occlusion bodies typical of the Baculoviridae family were observed. The pathogenicity of the virus was confirmed by following procedures outlined in Koch's postulates. This is the first register of a virus in Perigonia lusca in Brazil.

Foi constatada em lavouras de erva-mate (Ilex paraguariensis) na região produtora de Cascavel, estado do Paraná, elevada mortalidade de lagartas de Perigonia lusca (Lepidoptera, Sphingidae). Os insetos foram coletados no campo e levados para o laboratório, onde permaneceram sob observação até sua morte. As lagartas mortas foram maceradas, sendo verificada, sob microscopia fotônica a presença de corpos de oclusão na suspensão obtida. Folhas de erva mate foram imersas nessa suspensão e oferecidas a lagartas sadias. Estas manifestaram a sintomatologia típica de infecção viral, sendo então comprovada sua patogenicidade através do postulado de Koch. O vírus foi identificado como pertencente à família Baculoviridae, sendo este o primeiro registro da ocorrência de um vírus infectando esta espécie de inseto no Brasil.